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食品安全國家標準-食品微生物學檢驗-阪崎腸桿菌檢驗

GB 4789.40-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗

錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源:國家衛生部

前 言
本標準代替 GB/T 4789.40-2008 《食品衛生微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗》 。
本標準與GB/T 4789.40-2008相比,主要變化如下:
——修改了標準的中英文名稱;
——刪除了附錄A中A.3。
本標準的附錄A、附錄B為規范性附錄。
本標準所代替的歷次版本發布情況為:
——GB/T 4789.40-2008。

1 范圍
本標準規定了食品中阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii)的檢驗方法。
本標準適用于嬰幼兒配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎腸桿菌的檢驗。

2 設備和材料
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
2.1 恒溫培養箱:25 ℃±1 ℃,36 ℃±1 ℃,44 ℃±0.5 ℃。
2.2 冰箱:2 ℃~5 ℃。
2.3 恒溫水浴箱:44 ℃±0.5 ℃。
2.4 天平:感量 0.1 g。
2.5 均質器。
2.6 振蕩器。
2.7 無菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸頭。
2.8 無菌錐形瓶:容量 100 mL、200 mL、2000 mL。
2.9 無菌培養皿:直徑 90 mm。
2.10 pH 計或 pH 比色管或精密 pH 試紙。
2.11 全自動微生物生化鑒定系統。

3 培養基和試劑
3.1 緩沖蛋白胨水(buffer peptone water,BPW):見附錄 A 中 A.1。
3.2 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素(modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycin
medium,mLST-Vm):見附錄 A 中 A.2。
3.3 阪崎腸桿菌顯色培養基。
3.4 胰蛋白胨大豆瓊脂(trypticase soy agar,TSA):見附錄 A 中 A.3。
3.5 生化鑒定試劑盒。
3.6 氧化酶試劑:見附錄 A 中 A.4。
3.7 L-賴氨酸脫羧酶培養基:見附錄 A 中 A.5。
3.8 L-鳥氨酸脫羧酶培養基:見附錄 A 中 A.6。
3.9 L-精氨酸雙水解酶培養基:見附錄 A 中 A.7。
3.10 糖類發酵培養基:見附錄 A 中 A.8。
3.11 西蒙氏檸檬酸鹽培養基:見附錄 A 中 A.9。

第一法 阪崎腸桿菌的檢驗

4 檢驗程序

阪崎腸桿菌檢驗程序見圖 1。

阪崎腸桿菌檢驗程序

5 操作步驟
5.1 前增菌和增菌
取檢樣 100 g(mL)加入已預熱至 44 ℃裝有 900 mL 緩沖蛋白胨水的錐形瓶中,用手緩緩地搖動至充分溶解,36℃±1℃培養 18 h±2 h。移取 1 mL 轉種于 10 mL mLST-Vm 肉湯,44℃±0.5℃培養24 h±2 h。
5.2 分離
5.2.1 輕輕混勻 mLST-Vm 肉湯培養物,各取增菌培養物 1 環,分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養基平板,36 ℃±1 ℃培養 24 h±2 h。
5.2.2 挑取 1 個~5 個可疑菌落,劃線接種于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培養 48 h±4 h。
5.3 鑒定
自 TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落,進行生化鑒定。阪崎腸桿菌的主要生化特征見表 1。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統。

阪崎腸桿菌的主要生化特征

表 1 阪崎腸桿菌的主要生化特征

6 結果與報告

綜合菌落形態和生化特征,報告每 100 g(mL)樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。

第二法 阪崎腸桿菌的計數

7 操作步驟
7.1 樣品的稀釋
7.1.1 固體和半固體樣品:無菌稱取樣品 100 g、 1 0 g、1 g 各三份,加入已預熱至 44 ℃分別盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中,輕輕振搖使充分溶解,制成 1:10 樣品勻液,置 36 ℃±1 ℃培養 18 h±2 h。分別移取 1 mL 轉種于 10 mL mLST-Vm 肉湯,44 ℃±0.5 ℃培養 24 h±2 h。
7.1.2 液體樣品:以無菌吸管分別取樣品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份,加入已預熱至 44 ℃分別盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中,輕輕振搖使充分混勻,制成 1:10 樣品勻液,置 36 ℃±1 ℃培養 18h±2h。分別移取 1 mL 轉種于 10 mL mLST-Vm 肉湯,44 ℃±0.5 ℃培養 24 h±2 h。
7.2 分離、鑒定
同 5.2,5.3。

8 結果與報告
綜合菌落形態、生化特征,根據證實為阪崎腸桿菌的陽性管數,查 MPN 檢索表,報告每 100 g(mL)樣品中阪崎腸桿菌的 MPN 值(見附錄B中表 B.1)。

 

食品微生物學檢驗2010標準
食品微生物學檢驗2010標準(GB 4789)已于2010年3月正式頒布并于2010-06-01開始實施.
詳細請看:
GB 4789-2010檢驗標準
GB 4789-2010培養基目錄
食品微生物學檢驗2010標準
GB 4789.1-2010 總則
GB 4789.2-2010 菌落總數測定
GB 4789.3-2010 大腸菌群計數
GB 4789.4-2010 沙門氏菌檢驗
GB 4789.10-2010 金黃色葡萄球菌檢驗
GB 4789.15-2010 霉菌和酵母計數
GB 4789.18-2010 乳與乳制品檢驗
GB 4789.30-2010 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗
GB 4789.35-2010 乳酸菌檢驗
GB 4789.40-2010 阪崎腸桿菌檢驗
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