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食品安全國家標準-食品微生物學檢驗-大腸菌群計數

GB 4789.3-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數

錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源:國家衛生部

前言
本標準代替GB/T 4789.3-2008《食品衛生微生物學檢驗 大腸菌群計數》。
本標準與GB/T 4789.3-2008相比,主要修改如下:
——修改了標準的中英文名稱;
——"第二法 大腸菌群平板計數法"的平板菌落數的選擇范圍修改為"15 CFU~150 CFU";
——刪除了"第三法 大腸菌群Petrifilm TM測試片法"。
本標準的附錄A、附錄B為規范性附錄。
本標準所代替標準的歷次版本發布情況為:
——GB 4789.3-1984、GB 4789.3-1994、GB /T 4789.3-2003、GB /T 4789.3-2008。

食品安全國家標準
食品微生物學檢驗 大腸菌群計數
1 范圍
本標準規定了食品中大腸菌群(Coliforms)計數的方法。
本標準適用于食品中大腸菌群的計數。
2 術語和定義
2.1 大腸菌群 coliforms
在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。
2.2 最可能數 most probable number,MPN
基于泊松分布的一種間接計數方法。
3 設備和材料
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
3.1 恒溫培養箱:36 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱:2 ℃~5 ℃。
3.3 恒溫水浴箱:46 ℃±1 ℃。
3.4 天平:感量 0.1 g。
3.5 均質器。
3.6 振蕩器。
3.7 無菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸頭。
3.8 無菌錐形瓶:容量 500 mL。
3.9 無菌培養皿:直徑 90 mm。
3.10 pH 計或 pH 比色管或精密 pH 試紙。
3.11 菌落計數器。
4 培養基和試劑
4.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(Lauryl Sulfate Tryptose,LST)肉湯:見附錄 A 中 A.1。
4.2 煌綠乳糖膽鹽(Brilliant Green Lactose Bile,BGLB)肉湯:見附錄 A 中 A.2。
4.3 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(Violet Red Bile Agar,VRBA):見附錄 A 中 A.3。
4.4 磷酸鹽緩沖液:見附錄 A 中 A.4。
4.5 無菌生理鹽水:見附錄 A 中 A.5。
4.6 無菌 1 mol/L NaOH:見附錄 A 中 A.6。
4.7 無菌 1 mol/L HCl:見附錄 A 中 A.7。

 

第一法 大腸菌群 MPN 計數法
5 檢驗程序
大腸菌群MPN計數的檢驗程序見圖1。
大腸菌群MPN計數的檢驗程序

 

圖1 大腸菌群 MPN 計數法檢驗程序

6 操作步驟
6.1 樣品的稀釋
6.1.1 固體和半固體樣品:稱取 25 g 樣品,放入盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內, 8000 r/min~10000 r/min 均質 1 min~2 min,或放入盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質袋 中,用拍擊式均質器拍打 1 min~2 min,制成 1:10 的樣品勻液。
6.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 (瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成 1:10 的樣品勻液。
6.1.3 樣品勻液的 pH 值應在 6.5~7.5 之間,必要時分別用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 調節。
6.1.4 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL,沿管壁緩緩注入 9 mL 磷酸鹽緩沖液 或生理鹽水的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用 1 支 1 mL 無菌 吸管反復吹打,使其混合均勻,制成 1:100 的樣品勻液。
6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計,按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1 次,換用 1 支 1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過程不得超過 15 min。
6.2 初發酵試驗
每個樣品,選擇3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度接種3 管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯,每管接種1mL(如接種量超過1 mL,則用雙料LST肉湯),36 ℃±1 ℃培養24 h±2 h,觀察倒管內是否有氣泡產生,24 h±2 h產氣者進行復發酵試驗,如未產氣則繼續 培養至48 h±2 h,產氣者進行復發酵試驗。未產氣者為大腸菌群陰性。
6.3 復發酵試驗
用接種環從產氣的LST肉湯管中分別取培養物1環,移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)管中,36 ℃±1 ℃培養48 h±2 h,觀察產氣情況。產氣者,計為大腸菌群陽性管。
6.4 大腸菌群最可能數(MPN)的報告
按6.3確證的大腸菌群LST陽性管數,檢索MPN表(見附錄B),報告每g(mL)樣品中大腸菌群的 MPN值。

第二法 大腸菌群平板計數法
7 檢驗程序
大腸菌群平板計數法的檢驗程序見圖2。
大腸菌群平板計數法的檢驗程序

 

圖2 大腸菌群平板計數法檢驗程序
8 操作步驟
8.1 樣品的稀釋
按6.1進行。
8.2 平板計數
8.2.1 選取2個~3個適宜的連續稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿,每皿1 mL。同時取1 mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。
8.2.2 及時將15 mL~20 mL冷至46 ℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)約傾注于每個平皿中。小心旋轉平皿,將培養基與樣液充分混勻,待瓊脂凝固后,再加3 mL~4 mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉平板,置于36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h。
8.3 平板菌落數的選擇
選取菌落數在 15 CFU~150 CFU 之間的平板,分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落。 典型菌落為紫紅色,菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環,菌落直徑為 0.5 mm 或更大。
8.4 證實試驗
從 VRBA 平板上挑取 10 個不同類型的典型和可疑菌落,分別移種于 BGLB 肉湯管內,36 ℃±1 ℃ 培養 24 h~48 h,觀察產氣情況。凡 BGLB 肉湯管產氣,即可報告為大腸菌群陽性。
8.5 大腸菌群平板計數的報告
經最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計數的平板菌落數,再乘以稀釋倍數,即為每g (mL)樣品中大腸菌群數。例:10-4 樣品稀釋液1 mL,在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落,挑取 其中10個接種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數為:100×6/10×104/g(mL)=6.0×105 CFU/g(mL)。

食品微生物學檢驗2010標準
食品微生物學檢驗2010標準(GB 4789)已于2010年3月正式頒布并于2010-06-01開始實施.
詳細請看:
GB 4789-2010檢驗標準
GB 4789-2010培養基目錄
食品微生物學檢驗2010標準
GB 4789.1-2010 總則
GB 4789.2-2010 菌落總數測定
GB 4789.3-2010 大腸菌群計數
GB 4789.4-2010 沙門氏菌檢驗
GB 4789.10-2010 金黃色葡萄球菌檢驗
GB 4789.15-2010 霉菌和酵母計數
GB 4789.18-2010 乳與乳制品檢驗
GB 4789.30-2010 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗
GB 4789.35-2010 乳酸菌檢驗
GB 4789.40-2010 阪崎腸桿菌檢驗
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